首页 > 科研技术平台 > 蛋白检测 > 蛋白互作IP/Co-IP/ChIP
概念:
免疫沉淀(IP):免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)是一种利用抗体对特定蛋白进行纯化的技术。通过特异性抗体与目标蛋白的结合,可以将目标蛋白从细胞裂解液中沉淀下来,用于后续的分析。IP主要用于检测单个蛋白的状态,如表达量、翻译后修饰等。
免疫共沉淀(Co-IP):免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法。通过已知蛋白的抗体捕获整个蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。Co-IP的关键在于保持蛋白质-蛋白质相互作用的天然状态,因此通常采用非离子变性剂进行细胞裂解。
染色质免疫沉淀(ChIP):染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)用于研究蛋白质与DNA之间的相互作用,常用于检测转录因子结合位点。ChIP通过抗原抗体的特异性结合,沉淀与目的蛋白相结合的DNA片段,反映结合在DNA序列上的调控蛋白。
IP主要检测单个蛋白的状态,而Co-IP和ChIP用于研究蛋白之间的相互作用。
Co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作,而ChIP专注于蛋白质与DNA之间的相互作用。
Co-IP结果可能包含间接相互作用,而ChIP通常用于直接的蛋白质-DNA相互作用研究。
1. 细胞裂解条件:Co-IP实验中,应采用温和的裂解条件以保持蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂如Np40或Triton x-100。
2. 抗体选择:需要使用特异性强的抗体,以确保沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而非外源非特异蛋白。
3. 对照实验:进行Co-IP时,应使用对照抗体,如正常小鼠IgG或另一类单抗,以排除非特异性结合。
4. 蛋白质定位:确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的,这需要进行蛋白质的定位来确定。
5. ChIP实验:包括细胞固定、染色质断裂、染色质免疫沉淀、交联反应的逆转、DNA的纯化及鉴定等步骤,可以用PCR或者高通量测序鉴定DNA与蛋白质的结合情况。
我们提供的实验结果形式如下:
1、实验报告:包含实验设计、操作步骤、结果分析等详细描述,以及实验中使用的抗体、试剂和仪器等信息。
2、图像数据:包括Western Blot、免疫沉淀后的凝胶图像,以及ChIP实验中的PCR或测序结果图。
3、数据分析:提供蛋白质相互作用网络图,以及通过质谱鉴定得到的蛋白质列表和相对丰度。
4、技术支持:我们提供售后技术支持,确保客户在下游实验及投稿过程中的问题得到及时解决
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