概念：

活性氧（ROS）是含氧自由基和易形成自由基的过氧化物。

ROS是正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。但在环境压力胁迫下（如辐射、强氧化物处理等），ROS水平会急剧增加，从而对细胞结构造成严重损害，被称为氧化应激。

线粒体在呼吸产生能量时会将电势能储存在线粒体内膜。内膜两侧的氢离子及其他离子浓度的不对称形成了线粒体膜电位。细胞受到凋亡诱导后线粒体内膜通透性增加，线粒体膜电位下降。

钙(Calcium)是哺乳动物体内最为丰富的矿物质。钙离子参与调控很多细胞生命活动过程，包括肌肉收缩、细胞粘附、激素/神经递质释放、糖原代谢、细胞增殖/分化、血凝、神经或突触传递以及骨骼结构支持在内的大量生理过程。

原理与方法：

ROS：DCFH-DA本身无荧光，可透过细胞膜。进入细胞内被胞内的酯酶水解生成DCFH，失去细胞膜通透性，从而积聚在细胞内。细胞内的活性氧能将无荧光的DCFH氧化成有绿色荧光的DCF。通过检测荧光强度可反映活性氧的水平。

JC-1：正常情况下，JC-1在线粒体基质中形成聚合物，发红色荧光；而凋亡线粒体由于膜电位下降或丧失，JC-1以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光。JC-1颜色的变化能直接反映线粒体膜电位。

钙离子：Fluo-3AM和Fluo-4AM是常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针。荧光染料可以穿透细胞膜，本身荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。进入细胞后，可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3或Fluo-4，从而被滞留在细胞内，可以和钙离子结合,产生较强的荧光。

                                                                    ROS检测

                                                     JC-1检测

                                                     钙离子检测