概念:
细胞凋亡与细胞坏死不同,是由细胞自主的有序的死亡,涉及一系列基因的严格调控。是为了群体更好地适应生存环境而采取的细胞应对措施。通常表现为体积缩小、细胞核碎裂、胞质固缩和细胞膜破裂等特征。Annexin-V(膜连蛋白V)识别凋亡或坏死细胞表面的磷脂酰丝氨酸。PI(碘化丙啶)能与DNA结合的荧光染料,不能透过完整的细胞膜。
真核细胞周期包含细胞的生长、复制和分裂等一系列事件。细胞周期即为以分裂周期为单位的细胞发展过程。G1期(第1生长期)细胞生成RNA和蛋白质诱导生长,DNA含量无变化;S期(合成期)进行DNA合成,DNA含量逐渐增加;G2期(第2生长期)DNA复制后继续生长,为有丝分裂做准备,DNA的量为原来的两倍;M期(有丝分裂期)发生细胞核分裂和细胞质分裂,产生两个子细胞。将能DNA结合的荧光染料(常用PI)与细胞共同孵育,染料与细胞中的DNA按比例结合。用流式细胞术可以检测DNA含量在细胞群中的分布情况。
原理与方法:
细胞凋亡:制备单细胞悬液。弃去培养基,以PBS润洗一次,加入Annexin V-PI结合液重悬细胞,加入Annexin V-PI室温下避光孵育约15min。将染色完成的细胞避光冰浴,进行流式细胞仪检测。
细胞周期:制备单细胞悬液,以PBS洗涤一次,固定细胞。以预冷的PBS洗涤一次后,加入PI染色液37℃避光孵育30min,随机进行流式细胞仪检测。
细胞凋亡检测/细胞周期检测
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