一、ELISA实验介绍

 酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

二、实验目的与原理

ELISA目的是检测血清、尿液、细胞上清等液体中特定的抗原，以达到定性判断的目的。

ELISA原理即将已知的抗原或者抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。示意图如下：

三、实验步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1.将酶标板取出，分别设标准孔和样本孔，每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μL；待测样本孔中加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL（样本稀释5倍）。（加样顺序及相应编号见excel表中相关内容！）

2.弃去液体，将洗液工作液按350μL/每孔注入孔内，静置10s甩干，重复洗板5次，在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

3.每孔中加入检测抗体50μL（在使用前10分钟内配制），充分混匀，贴上不干胶封面，37℃温育30分钟。

4.重复步骤2。

5.每孔加显色剂A 50μL，显色剂B 50μL，振荡混匀后，37℃避光显色10分钟，每孔加终止液50μL。

6.用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。在反应终止后10分钟内检测。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

7.实验完毕后，未使用完的试剂按规定保存温度放回冰箱保存。

四、数据展示

五、送样运输要求

1、动植物组织样本(干冰运输)

准确称取动物组织重量按重量(MG):体积(UL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水)，冰水浴条件下，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500~3000转/分钟，离心10分钟，取上清液进行测定。

2、血清样本(干冰运输)

全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜(GLU检测请勿全血样本放置过夜取血清)后于2-8℃ 3000转/分离心15MIN，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

3、血浆样本(干冰运输)

可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃C3000转/分离心15MIN，取上清即可立即检测;或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存但应避免反复冻融。解冻后的样本应再次离心，然后检测。

4、细胞样本贴壁细胞

将细胞用PBS冲洗2次后，用细胞刮将细胞小心刮下来，将培养液3000转/分，离心10MIN。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。悬浮细胞:将培养液3000转/分，离心10MIN。弃上清留细胞沉淀，干冰运输。

5、细胞上清:  标本于2-8℃，3000转/分离心15MIN取上清，上清立即用于实验或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。