细胞培养概念：是一种在体外模拟体内环境的方法，‌通过提供无菌、‌适宜温度、‌酸碱度和一定营养条件等，‌使细胞能够生存、‌生长、‌繁殖并维持主要结构和功能的一种技术。‌这种技术不仅在生物学研究中扮演着重要角色，‌而且在医学、‌农业科学等领域也有广泛应用。‌细胞培养也被称为细胞克隆技术，‌是生物工程技术中核心、‌基础的技术之一。

体外细胞共培养（co-culture)概念：是将两种细胞（可以来自同一种组织，也可以来自不同的组织）混合共同培养，从而使其中一种细胞的形态和功能稳定表达，并维持较长时间。该技术能模拟体内生成的微环境，便于更好地观察细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能作用的靶点，填补了单层细胞培养和整体动物实验的鸿沟。

体外细胞加药培养概念：此试验非常适合药物作用机理的研究，能初步快速有效的探究化合物/药物的功能和相关信号通路，在具体研究工作中，经常将细胞试验与整体试验有机结合，从不同角度分析药物的作用和机理，能起到相互补充，相互印证的极好效果。

实验流程：

1、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入370C预热的DMEM完全培养基中(其中胎牛血清约为10%)，轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

2、细胞传代

当细胞密度达到80%~90%(过早产量不足，过晚细胞状态不佳，1:2至1:10以上的比率传代培养，一般1:3至1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂次数)时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。

加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是370C。显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度)进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。

加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

3、细胞冻存

当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1XPBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入lml冻存液(90%胎牛血清，10% DMSO。

一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存波中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞)，放入冻存管内(管内有异丙醇，以保证温度降低的速度)，立即放入40C冰箱中冻存30min，然后放入-200C冰箱中冻存30min，再置于-80℃冰箱内过夜。第二天放入液氨中，可以保存至少两年，如不放人波氮，可以保存三个月。

细胞冻存和复苏的原则是:慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力，冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡

服务流程：

1、提供详细实验方案。

2、接收样本。

3、培养传代细胞。

4、细胞计数，接种细胞。

5、根据实验要求干预处理细胞。

6、根据实验要求进行后续检测。

样本要求及运输条件：

1、客户提供细胞样本：

（1）传代培养的细胞，需告知细胞名称、培养条件等基本信息，无细胞名称的细胞将不提供冻存服务，无培养条件的细胞将无法提供及时的传代培养等操作。

（2）寄送冻存细胞需用充足干冰保存运输。

（3）寄送培养细胞需拧紧培养瓶（不透气瓶盖），装满培养基，封口膜封好，常温运输，严禁冰冻。

（4）细胞状态以收到细胞后的观察状态为准。

2、客户提供实验中的相关试剂：

（1）提供试剂货号、保质期、保存条件等基本信息。

（2）配制好的试剂需提供名称、浓度、安全性等信息。

（3）不接收具传染性的样本、试剂药物等等；不接收有生物危害的样本；不接收有致病性的样本。