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概念:
Transwell小室通过模拟细胞穿越基底膜的行为,来研究细胞的运动性。Transwell小室由一个多孔的聚碳酸酯膜和上下两个室组成。在一个杯子中间置入一层多孔隔断而分成上下两层。细胞被接种在上室,而下室包含诱导细胞迁移的成分,可以是另一种细胞也可以是人为添加趋化因子等。随后,细胞通过膜上的孔隙迁移到下室,
可研究处理因素对目的细胞的迁移和侵袭能力的影响,以及细胞间相互作用等对细胞迁移和侵袭的影响。
原理与方法:
取生长状态良好的细胞进行饥饿处理约24h。准备Transwell小室,根据实验设计,选择是否添加基质胶包被。将处理好的细胞消化重悬,用无血清培养基调整细胞浓度至适当密度。在下室加入适量的诱导剂(血清)接种细胞,并将细胞悬液加入Transwell上室。将Transwell小室放回培养箱中,培养24-48h。实验结束后,用4%多聚甲醛固定后用PBS洗涤小室1次;结晶紫染色10min,随后用PBS洗涤2-3次。显微镜下随机选取若干视野,计数迁移到膜下侧的细胞数量。根据细胞数量计算细胞迁移或侵袭的百分率。
Transwell迁移/侵袭实验
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