业务热线:

027-86925668

考马斯亮蓝染色

考马斯亮蓝染色

实验概念:

考马斯亮蓝染色是一种基于蛋白质与考马斯亮蓝染料之间结合反应的蛋白质检测、纯化和定量分析技术。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,与蛋白质结合后变为蓝色,其光吸收值与蛋白质含量成正比,常用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测


实验流程:

  1. 电泳首先,将蛋白质样本通过SDS-PAGE电泳进行分离。
  2. 染色电泳结束后,将凝胶放入考马斯亮蓝染色液中,室温染色1小时或更长时间,直至凝胶颜色与染色液颜色接近。
  3. 脱色倒出染色液,加入由甲醇、醋酸和去离子水组成的去染液,震荡脱色2-3小时或直至背景清晰。
  4. 观察与记录脱色后,在显微镜下观察蛋白质条带,并使用相机或扫描仪记录结果。


注意事项:

  1. 操作安全:考马斯亮蓝染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,操作过程中需佩戴手套,避免染料接触皮肤。
  2. 染料毒性考马斯亮蓝染料有毒性,不建议加热使用。操作后需妥善处理废弃物。
  3. 样品清洗染色前用纯水清洗凝胶能大大减少SDS等干扰杂质。
  4. 染色后处理染色后请尽快拍照,纯水长时间浸泡会导致蛋白和染料的流失。
  5. 试剂品质对染料的品质无严格要求,但考马斯亮蓝G-250中可溶性染料的含量因来源和供应商不同变动很大,通常认为Serva蓝G含量最高。
  6. 器皿要求使用洁净无洗涤剂的塑料器皿或玻璃器皿,请勿使用石英、硅胶比色杯,因为染料会结合在此类材料上。


我们提供的结果形式:

  1. 图像数据提供染色和脱色后的凝胶图像,展示蛋白质条带的分布情况。
  2. 定量分析通过测量595nm处的吸光度,提供蛋白质含量的定量分析结果。
  3. 实验报告包含实验设计、操作步骤、结果分析等详细描述,以及实验中使用的试剂、仪器等信息。
  4. 技术支持提供售后技术支持,确保客户在下游实验及投稿过程中的问题得到及时解决。